我要分析人類tph a218c型別，片段大小大百八九百bp吧，因為我是新手的關係，有時候實驗成功跑電泳跑得出來，有時候跑不出東西，我是指同樣的條件下喔，請問會是那些步驟出了問題呢？
2007-03-27 18:34:18 · 3 個解答 · 發問者 幸福 2 in 科學 ➔ 生物學
之前實驗load pcr產物進gel都沒什麼問題，直到有次刺破後，所謂一朝被蛇咬，十年怕草繩，從此我都 load太淺，dna好像都會跑出來一點點，跑膠明明才跑三十多分，跑到後來，連ladder都跑不出來，我學長叫我把膠做高一點，然後洞深一點，這樣load的成功率會變高，請問還有其他改進空間嗎？
2007-04-02 12:03:01 · update #1
1. tip的污染
2. 藥品是否每次都有完全溶解、退冰
3. cDNA的純度，否則可能loading時會浮上來，就跑不出來了
4. LOADING時，要注意有沒有完全load到well中(和dye均勻混合)
5.EtBr
.......
2007-03-28 22:39:26 補充：
對了~~溫度的控制也是一個factor
2007-03-28 22:41:10 補充：
我當初是每一個步驟
一道道檢查下來
每個藥品、sample、器材都要注意
應該可以發現問題
但要花很多時間~~~~
good-luck~~~
2007-04-08 18:09:45 補充：
請問ladder是指marker嗎????
沒錯~~應該就是把膠做厚一點.....
大膽的load下去吧!!! ^^
2007-04-08 18:10:39 補充：
DNA當然要完整load下去才跑的出東西啊~~
有問題再寄信問我也ok~~
2007-04-08 18:13:51 補充：
目前也正在學習這方面的知識 ^^
2007-03-28 18:38:32 · answer #1 · answered by Keziah 3 · 0⤊ 0⤋
老手回答你的問題就是
最快的是你看你旁邊或校園內只要你認識有在做PCR 成功的 跟他要PCR 的東西 再加你的cDNA 看會不會出來囉
1) RNA 的品質不好
量不夠 (可以解決的就是 加多點 要不然就是 CYCLE 弄高點囉-雖然不太好 不過先做出來有個交代吧)
2)污染 我覺的還好啦 最多批出別的東西
3)polymerase 失效了 可能大家開開關關下 要不然放久了 它就失效啦
4 Etbr 簡單啦 你可以load 進去當你配膠時 或外染ㄚ 就自己重配新的去做
2007-03-30 06:36:02 · answer #2 · answered by kaolp 5 · 0⤊ 0⤋
如果你跑PCR的機器是有一點年紀的
那麼可能就要測試一下每個well的差異了
建議是將每個well都用相同condition的positive control跑一次PCR來鑑定每個well的優劣
2007-03-27 21:00:27 · answer #3 · answered by Potoss 4 · 0⤊ 0⤋