co-immunoprecipitation
原理及操作方法為何？請詳細黑
2006-12-04 19:50:27 · 1 個解答 · 發問者 dipole 1 in 科學 ➔ 化學
此方法的原理是，在細胞裂解液中加入抗興趣蛋白的抗體，孵育後再加入與抗體特異結合的結合於Pansobin珠上的金黃色葡萄球菌蛋白A(SPA)，若細胞中有正與興趣蛋白結合的目的蛋白，就可以形成這樣一種復合物：「目的蛋白—興趣蛋白—抗興趣蛋白抗體—SPA\|Pansobin」，因為SPA\|Pansobin比較大，這樣復合物在離心時就被分離出來。經變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，復合物四組分又被分開。然後經Western blotting法，用抗體檢測目的蛋白是什麼，是否為預測蛋白。這種方法得到的目的蛋白是在細胞內天然與興趣蛋白結合的，符合體內實際情況，得到的蛋白可信度高。但這種方法有兩個缺陷：一是兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋樑作用；二是必須在實驗前預測目的蛋白是什麼，以選擇最後檢測的抗體，所以，若預測不正確，實驗就得不到結果，方法本身具有冒險性。
那麼能不能找到一種冒險性小，又能直接獲得目的蛋白結構信息的方法呢?既然編碼蛋白的基因序列比較容易測得，所以能不能把待選的蛋白與編碼它的基因聯繫起來呢?於是科學家們又建立了篩選基因工程蛋白文庫的兩種方法：cDNA表達文庫的篩選和噬菌體表面呈現技術。
詳細原理及操作方法如下網址:
http://gene.bjmu.edu.cn/grad_edu/download/28.ppt
2006-12-10 16:41:59 · answer #1 · answered by Sai 6 · 0⤊ 0⤋