有關亮光素(Lucigenin另有譯名為光澤精)化學發光

Question

1. 試藥：亮光素（Lucigenin，化學式名為雙-N-甲基ㄚ啶硝酸鹽，Bis-N-Methyacridinum，可由藥商購自Aldrich公司）600mg，濃氨水45mL；乙醇210mL；3%過氧化氫60mL；螢光黃（Fluorscein，可購自Aldrich公司）100mg；薔薇紅（Rhodamine B，可購自Aldrich公司）100mg。
2. 器具：300mL三角瓶三個及軟本塞三個。

【實驗】

1. 調製試液：在抽氣箱內，或在通風良好的實驗室進行。首先將一個三角瓶，盛入150mL的乙醇興濃氨水45mL，然後三等分，分別盛入註有A、B、C記號的三個三角瓶。另外，一個三角瓶內盛入乙醇60mL及亮光素600mg混合溶液（完全溶解為止），再將此溶液分成三等分，各20mL，分別注入A、B、C三角瓶內。然後將A瓶用橡皮塞（或軟本塞）塞住。另加螢光黃100mg於B瓶，及加薔薇紅100mg於C瓶內，然後全部用軟本塞塞住瓶口。此項調製工作，皆在表演前才準備，試液不能放置太久，否則，效果不佳。
2. 發光表演：實驗最好在暗處進行，才能觀賞到美麗的色光

。開始¬ 將A瓶加入20mL的3%過氧化氫，振盪之，隨之發出藍色光。­ 同樣加20mL的3%過氧化氫於B瓶，則發出黃綠色光。® 加20mL的3%過氧化氫於C瓶，則發出紅色光。若將三瓶併排，觀察其發光之強度效果較好。各種色光，發出的時間，由加入的染料種類不同而異，大約1-2分鐘之內。在整個操作上，要注意的是，不要將這些染料及過氧化氫（強氧化劑）沾在手上，若一時沾上，要用水沖洗幾次。用過之溶液，不宜隨便倒棄，若要倒棄時，要用水充分的沖淡之，始流出。

【解說】

化學發光，係利用化學反應，分子（或原子）被激發之後，由激發狀態回到原來基底狀態時，把一部分能量以光的方式放出的原理，另一方面，以熱的方式放出等。而一般物質能否發射光，要看分子的構造及激發的能量是否足夠，同時該物質的發光效率高低等都有關係。自然界的螢火蟲之發光，是在它的體內有高能量的物質，經一種酵素當觸媒作用反應所發出的。

本實驗所使用的亮光素，是早在1935年就被發現，當它的鹼性水溶液存在有還原劑或氧氣時，會產生化學發光。之後，被利用在臨床化學方面，分析一些還原醣類或葡萄酸等。在本實驗，A、B、C三瓶所發出的色光過程，可以由下列化學反應式加以說明。首先，亮光素（1）經NH3/H2O2反應生成高能量的環氧化物（1），然後分解生成激發態的ㄚ啶酮（3），當回原基底態時，發射螢光。但是當有螢光色素染料存在時，如B瓶內有螢光黃，則發出黃綠色光。C瓶內有薔薇紅，則發出紅色光。
有關這個實驗內容的網站!!
如果有解說原因的更好!
但是不要留這一個網站: http://www.hcsh.tpc.edu.tw/~s_chsc/A03.htm

Answer 1

你可以參考依下

自由基及抗氧化分析儀 Chemiluminescence Analyzer


背景資料
設置緣由：
本設備為高敏感性的化學冷光偵測儀，適合作為氧自由基的分析實驗。

核心技術簡介：
本設備使用低溫的高敏感性感光探測器，可以定量測量微量化學冷光，需設置在避光環境中，並保持儀器的清潔穩定。

服務相關之研究發展（血液中氧自由基測定法）：
超氧陰離子自由基superoxide anion O<sub>2-：
發光試劑Lucigenin會與超氧陰離子自由基有較luminol專一性的反應，並可以SOD超氧歧化脢進行抑制檢測。

抽取0.2ml新鮮全血樣品，避光（鋁箔紙包住試管外層）並置於冰中，加入0.1ml，pH7.4的PBS緩衝液，放入自由基分析儀試料室的分析暗室中，再測定200sec後，加入1ml，0.01mM Lucigenin（溶於pH7.4的PBS緩衝液）後，持續偵測600sec的發光反應；同時也可以用不同濃度的超氧歧化脢（SOD）進行超氧陰離子自由基的抑制反應，以為佐證。

Reference：Experientia 52 141-144（1996）

Reference：Free Radicals in Biology and Medicine 3<sup>rd edition.Barry Halliwell（1998）

全血中總氧自由基的測定：
抽取0.2ml新鮮全血樣品，避光（鋁箔紙包住試管外層）並置於冰中，加入0.1ml，pH7.4的PBS緩衝液，放入自由基分析儀試料室的分析暗室中，再測定200sec後，加入1ml，0.01mM luminol（溶於pH7.4的PBS緩衝液）後，持續偵測600sec的發光反應。

Reference：Anal. Biochem.253, 162（1997）

氫氧自由基：OH
抽取0.2ml新鮮全血樣品，避光（鋁箔紙包住試管外層）並置於冰中，加入0.1ml，pH7.4的PBS緩衝液，放入自由基分析儀試料室的分析暗室中，再測定200sec後，加入1ml，3μM Indoxyl-β-D-Glucuronide（溶於pH7.4的PBS緩衝液）後，持續偵測600sec的發光反應。

Reference：Clin. Chem.40, 1580-1586（1994）

設施規劃與說明
儀器∕空間
放置於醫學院二樓公用儀器室，以不透光窗簾圍繞，使用人請勿將窗簾拉開以避免透光而影響實驗時的偵測。

人員
本實驗室只管理儀器的使用規範，以及第一次使用者的教學動作，其餘實驗用的試劑及耗材請由個使用者實驗室自行負責購買。

常規服務
本實驗室將提供下列服務：
第一次使用本儀器需事前知會本實驗室負責人，本實驗室會安排人員做儀器教學，而操作當中的基本配備如：試料盤、專用注射針頭，放置於收納盒內收藏在本實驗室。</sup></sub>

Answer 2

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