HPLC的圖譜

Question

最近這幾天都在做實驗，關於層析的。

一開始做ＴＬＣ片，這個ＯＫ，沒問題。
後來做管柱層析，層析之後再拿去做ＨＰＬＣ，
做完之後發現一個問題，全部的圖譜都長得一樣＝　＝

問題是這樣的…

一開始我們拿葡萄子去做管柱層析
用了五種溶劑去沖堤它，
第一種：乙醇１００ＭＬ
第二種：甲醇５０ＭＬ＋乙醇５０ＭＬ
第三種：甲醇１００ＭＬ
第四種：甲醇５０ＭＬ＋丙酮５０ＭＬ
第五種：丙酮１００ＭＬ
總共蒐集五杯產物，拿去減壓濃縮之後，
先冰在－２０度Ｃ的冰箱，隔天再拿去ＨＰＬＣ

這個實驗８／９（三）下午開始進行，
８／１０（四）早上滴了第一種溶劑，開始漫長的等待…
８／１１（五）經過大約１０小時的等待，蒐集了第一瓶產物
８／１４（一）蒐集了第二和第三瓶產物
８／１５（二）蒐集了第四和第五瓶產物
同時在星期二的時候，用水＋甲醇＋乙醇＋ＤＭＳＯ（體積同）（純粹溶劑）
去把五瓶產物都溶掉，然後各取１點５ＭＬ去做ＨＰＬＣ
結果出來的圖表都一樣，六個圖（第一個是純粹溶劑）都長的差不多
高鋒位置一樣，高度也一樣…

請問板上的高手，知道這是為什麼嗎？
是因為溶劑的問題？
還是管柱層析的時候，矽膠沒有堆疊好？
或是取溶劑有問題呢？
或是其他大概的原因，可以說一下嗎？謝謝。

Answer 1

請說明管柱層析用什麼absorbent silica gel? C-18? LH-20?

2006-08-19 12:37:33 補充：
矽膠是Si-O的聚合物 其表面具很多醇基:
圖片參考：http://class.fst.ohio-state.edu/fst601/Lectures/liquidchrm/Image113.gif
http://class.fst.ohio-state.edu/fst601/Lectures/Liqchr.htm您用的溶劑第一種便是乙醇 太極性了 所以樣品中化合物差不多沒滯留 都一起出來了 又因溶劑量不夠多(100mL)因此仍有些殘餘留在管子內 接下來的幾個溶劑都是差不多極性 因此5個fraction都有同樣的東西一開始便用EtOH流洗 EtOH會如水般搶矽膠表面醇基 所以大多化合物都不滯留管中 如果樣品中有多酚或水溶性極佳化合物 更會在矽膠內拖拖拉拉請先看文獻用的absorbent是什麼 以提供的流洗 倒像是用 Sephadex 或 polyamide 不是用矽膠如果矽膠TLC可成 而又希望以此為依據做管柱層析的話 則管柱層析的移動相要先用比TLC系統更非極性的 才有機會得分難效果

2006-08-19 12:46:21 補充：
矽膠表面醇基吸附水圖:http://www.scibio.unifi.it/lezioni/figure/silice.jpg

Answer 2

回Yy大師
是一般的矽膠(最便宜的那種) 我不知道那是啥？
為什麼我知道呢？因為我也有做....