關於微生物的幾個基本問題

Question

1.試述工作人員、培養基、和工具的消毒法
2.請問Generation time的意義並劃出曲線說明
3.試述Gram stain（革蘭氏染色法）的原理和方法，並說明
細菌細胞壁構造對革蘭氏染色法的影響
4.簡述細菌鑑定的方法
5.請問何謂選擇性培養基「Selective medium」，試舉例2種培養基說明
6.試述細菌的保存方法
7.簡述計算細菌數量的方法
8.如何分離及純化細菌

Answer 1

1.工作人員:消毒法不外乎就是勤洗手或是75%酒精
培養基:大部分培養基都是用autoclave(高壓蒸氣滅菌鍋)來達到無菌的狀態,有些
培養基不耐熱只能用過濾器的方式
工具:福馬林.戊二醛.75%酒精皆可

2.Generation time(世代時間):
lag phase(遲滯其)-細菌剛接種,最初步會快速分裂
log phase(對數期)-細菌代謝旺盛,分裂生殖快速,臨床上做實驗都用此期的菌株
stationary phase(靜止期)-養分減少,妨礙生長的代謝產物增加屎細菌生長緩慢
death phase(死亡期)-養分不足,代謝物有害於細菌生長屎細菌死亡

3.Gram stain:
原理-細胞璧成分不同造成染色結果不同,G(+)富含teichoic acid,染上主染劑
crystal violet不易被酒精脫色,而G(-)細胞壁只含脂質會被酒精脫色,而被覆
染劑safranin染上
方法-crystal violet 1分
gram's iodine 1分
95% alcohol 10-20秒
safranin 30秒-1分

4.菌種鑑定方法:
初步先用Gram stain區分出G(+)還是G(-),G(+)有GPC.GPB.yeast在做接下來各類的
試驗,G(-)分出GNB.GNF

5.Selective medium:
利用化學物質抑制某一群細菌的生長而不影響欲分離細菌的生長
ex.EMB.MAC

6.保存方法:
冷凍細胞,用DMSO或TSB + 15%glycerol

7.數量計算的方法:
direct microscopic count(直接鏡檢法)-顯微鏡下計算細菌數
standard plate out(標準平板計數法)-將細菌稀釋後把菌液均勻塗抹至培養基,在計
算長出的colony
turbidity(混濁度計數法)-用固定的波長照射細菌懸浮液,用透光率算出
dry weight(乾重法)-將過濾的細菌乾燥後秤重,由重量推算細菌數目

8.分離及純化:
把細菌培養至培養基,培養O/N,取單一colony做sub culture的動作,須注意不可以
取到別的colony,如還是有混合的colony出現,須在執行sub culture的動作,多次的
sub culture後就可以將欲分離的細菌分離且純化出來