如何利用HPLC作分析

Question

問題一:
假設我有溶液A
但是並不了解溶液A中的主要成分
我要如何利用HPLC來分析出溶液A中的主成分為何?

問題二:
因為不知道溶液A的主成分是什麼
所以mobile phase要如何做選擇?

問題三:
要使用什麼溶液來稀釋溶液A成適當濃度再作分析較適當?

請不要轉貼文章
請將個人經驗寫下來

TLC片是什麼東西?
要如何進行監控呢

我還真的對層析不太清楚呢...sorry..請高手再教我一下..
你說將sample點在TLC片上..放到玻璃瓶中..讓你的solvent在TLC片上跑到一定的高度..就會看到在TLC片上出現很多點..每個點表示不同的成分..

這樣子的話...
能利用TLC分辨出最適合分離出sample的溶劑囉!
(也就是可以利用此方法找到最適合的mobile phase 吧)
TLC片上出現的點就代表不同成份的話,要如何分析出這些成分是什麼物質?

再補充一下,
我使用的HPLC算是陽春型的,只有pump+UV Detecter+autosampler
所以應該沒法像你說的使用核磁共振來分析成分...
想再請教你,那我應該怎麼做比較好..
真是麻煩你了 謝謝

Answer 1

你是想利用HPLC來分析..那應該是要用可回收的HPLC..
HPLC大概主要是由column+RI detector+積分儀 組成的
最重要的就是mobile phase...也就是利用solvent極性的不同來分離溶液A..
所以你先必須找出最佳的solvent極性(mobile phase)來看你的溶液A是否有被分離..也就是先利用TLC片來做監測..當你找到了有一種solvent極性可以把你的溶液A有達到分離的效果在TLC片上...
這時候你就可以配製此溶液來做你的HPLC的solvent system..
接下來你就讓你的solvent system來平衡你的column..
最後你的溶液A要先抽乾..在加你的solvent system稀釋溶解..
然後就注射到column裡面..經過RI detector...再到積分儀..
這時候積分儀就會畫出很多peak出來..每根peak就是你溶液A中所含的成分..
而每根peak你就可以回收起來..再利用NMR(核磁共振)儀器來鑑定你的結構..
你說要主成分的話..那你在積分儀看到最大根的peak就會是你要的主成份..
你的問題我應該都有回答了...

2006-03-01 19:57:29 補充：
TLC片一般是由鋁片和silica gel所組成而成的那它的原理跟我們在流column(管柱層析)的原理是一樣的我們會先把我們要的solvent system放在玻璃瓶中(加蓋)然後你的sample要先稀釋..之後把sample點在TLC片上..最後就放到玻璃瓶中..讓你的solvent在TLC片上跑到一定的高度..然而你就會看到在TLC片上出現很多點..每個點表示不同的成分..

2006-03-01 19:57:54 補充：
其實你在問TLC片是什麼東西..我就大概知道你應該很不了解這方面的事..這種東西也要看儀器怎麼使用..自己來操作一次會更了解..不然我這樣的說..你還是會有一點糢糊的...

2006-03-08 20:07:58 補充：
pump+UV Detecter+autosampler
你說的這種型態..應該是不能回收的..所以也就是不能拿去作核磁共振..這種型態大部分都是用來做純度的分析..通常都是你自己要去做管住層析..然後再收集你所分離出來的成分..接著你就可以用你的儀器..去看你的純度有沒有很純..然後再去測nmr..

2006-03-08 20:16:19 補充：
所有的成分都是必須做核磁共振的鑑定..而這種儀器通常在大學的化學系才會有..你是真的要做的..還是你只是要知道怎麼做寫報告而已??