TLC與HPLC分析成分的問題?

Question

想請問..我今天以有機溶濟溶解出中草藥的成分,要進行成分分析..兩個(TLC&HPLC)分析出的結果是有何差別呢?可否"簡單"的敍述一下....
還有,TLC與HPLC這兩種在做成分分析的時候,都需要標準品嗎??

Answer 1

"簡單"回覆你一下，TLC和HPLC兩者都有因為塗佈和填充料有分為正向和逆向，以TLC有九成以上都是用silica gel塗佈，所以極性越低跑的越慢，極性越高跑的越快(就是跟Rf有關)，而HPLC目前有八成左右都是用reverse phase所以剛好會跟TLC會相反(極性高的先出來)，至於標準品....則依你做實驗的目的有所不同，如果你要取出的是主要成分而你身邊有已知的compound就需要，省下Identify的時間，但是一般中草藥的標準品非常難買到，只有少數幾種植物的標準品可以買的到，一般都是實驗室置備(分離、純化)，中草藥的成分要直接靠HPLC就知道成分除了看paper是條件以外，其他應該很難，連LC-MS/MS都不容易Identify。

Answer 2

兩者都需使用標準品。
TLC原理和SDS-PAGE相同，但TLC是用物質的擴散和毛細管定理去製作，優點是很快可以跟標準品比對，缺點是分子量大的物質不容易擴散，很容易重疊，且樣品不易回收，所以以分子量小的物質比較容易分離比對。

HPLC的分析，分子分離精確度高，可以依照圖譜中分析時間的先後，和標準品的圖譜比對，可以清楚明確判定該物質是否符合標準品，且樣品可以容易回收。缺點時間較長。