¿ en que consiste el analisis del PLFR ? ¿ como0 se da ?

Question

expliquenme el analisis de polimorfismo de longitud del fragmento de restriccion para localizar un gene.
Porfavor detalladamente.

Answer 1

La utilidad de la ingeniería genética es la identificación inequívoca de un individuo a partir de su patrón genético. Cuando se toma el ADN de una célula y se somete a la acción de enzimas de restricción, se obtiene una colección de fragmentos de todos los tamaños posibles. Una sonda (una secuencia de ADN marcada radiactivamente) específica se unirá a determinados fragmentos en determinadas posiciones. Si el procedimiento se lleva a cabo en zonas del ADN que sean polimórficas, esto constituye una especie de “huella” identificativa, que es distinta de la de otro individuo, pues otro ADN, sometido a la acción del mismo conjunto de enzimas de restricción, rendirá una serie de fragmentos diferente de la anterior, uniéndose la sonda entonces a otros, en otras posiciones. Esta huella genética es de amplio uso en criminología, pruebas de paternidad, etc., y su fiabilidad es altísima; se denomina análisis del polimorfismo de los fragmentos de restricción, o PLFR.

Pero al PLFR tiene también aplicación médica, ya que determinadas huellas genéticas está asociadas a probabilidad de contraer enfermedades como diabetes, alzheimer, cáncer, etc. De ahí su utilidad para el diagnóstico genético. Actualmente hay una verdadera carrera entre laboratorios para elaborar sondas con valor clínico.

Y, finalmente, la PLFR puede contribuir a elaborar el mapa genético de una especie dada. De hecho, es la técnica que más está haciendo avanzar al Proyecto Genoma Humano. Otra técnica, muy prometedora, es la YAC (de yeast artificial chromosome, o cromosoma artificial de levaduras). Consiste en que, gracias al descubrimiento de las proteínas que estabilizan e identifican este tipo de corpúsculos en esta clase de organismos, es posible fabricar cromosomas artificiales con el ADN deseado e introducirlos en las levaduras. Su comportamiento se similar al de los otros cromosomas y tienen la ventaja de admitir grandes cantidades de ADN. En unos pocos miles de YAC's será posible incluir todo el ADN de la especie humana. Luego sólo habrá que analizar sus productos, clasificarlos, identificar similitudes y diferencias en las proteínas que se elaboren a partir de ellos, y superponer los resultados.
______________________________________________

Podras encontrar mas informacion en las paginas web que te envio..
Suerte..

Answer 2

Apreciada amiga charlotte:

Todo se inicio, como una inquietud, por parte del MINISTERIO DEL INTERIOR BRITANICO, quien le encargo al DOCTOR ALEC J. JEFFREYS, de la UNIVERSIDAD DE LEICESTER, una forma de identificacion genetica.
Jeffreys, descubrio la existencia de unas regiones minisatelites hipervariables dispersas por el genoma humano, que al ser tratadas, con enzimas, de restriccion generaban fragmentos de longitud variable. Y que estas regiones se repetian en tandem de una secuencia central siendo una variable de una persona a otra.
El primer locus fue descubierto por WYMAN Y WHITE, en 1980, con una sonda de ADN ARBITRARIA, asi observaron fragmentos de mas de 15 longitudes diferentes, en una peque;a muestra de individuos. Otras hipervariables, como en lal secuencia del gen , se han hallado en la insulina humana, en el ONCOGEN "RAS", en el seudogen Z-GLOBINA, Y EN EL GEN DE LA MIOGLOBINA.
EL ANALISIS CONSTA DE LAS SIGUIENTES FASES:


1.DIGESTION DEL ADN CON ENZIMAS , TRAS CONSEGUIR EXTRAER UN ADN DE ALTA MOLECULARIDAD.
2. SE SEPARAN LOS FRAGMENTOS POR ELECTROFORESIS EN AGAR ROSA.
3. DESNATURALIZACION DE LOS FRAGMENTOS SEPARADOS Y CONTADOS.
4. TRANSFERENCIA DE LAS CADENAS SIMPLES A UNA MEMBRANA DE NITROCELULOSA O NYLON, Y FIJACION DE LAS MISMAS POR CALOR, A 80 GRADOS CENTIGRADOS.
5. PREHIBRIDACION CON SONDAS DE ADN INESPECIFICO. PARA BLOQUEAR LOS LUGARES DE UNION INESPECIFICOSQUE PUDIERA HABER EN LA MEMBRANA.
6. MARCAJE DE LA SONDA, CON NUCLEOTIDOS RADIACTIVOS, P32, NORMALMENTE.
7. HIBRIDACION DE LA SONDA, MARCADA Y DESNATURALIZADA CON LOS FRAGMENTOS DE ADN FIJADOS A LA MEMBRANA, Y LAVADO DE LA MEMBRANA PARA EVITAR EL EXCESO DE SONDA, O AQUELLOS QUE HALLAN HIBRIDADO MAL.
8. REVELADO EN PLACA RADIOGRAFICA E INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS.
9.EL TIPO DE SONDA PUEDE SER DE DOS TIPOS, MONOLOCUS, QUE SON INESPECIFICAS , Y SE USAN PARA UNA REGION DE UN DETERMINADO CROMOSOMA.
SE UNEN SECUENCIAS LARGAS DE NUCLEOTIDOS Y PRESENTA MAYOR VARIABILIDAD QUE LOS MULTILOCUS.
ASI PUEDE VERSE UNA O DOS BANDAS POR INDIVIDUO MONOCIGOTO O HETEROCIGOTO.
EL PATRON DE BANDAS SE LLAMA DNA PROFILING.

LAS SONDAS MULTILOCUS, SE HIBRIDAN CONSECUENCIAS MINISATELITES PRESENTES EN VARIOS LOCI, DE DIFERENTES CROMOSOMAS, SON SONDAS DE 10 A 15 NUCLEOTIDOS QUE SE REPITEN MULTIPLES VECES, Y TRAS EL REVELADO SE OBSEVA DE 10 A 20 BANDAS POR PERSONA.
DENOMINANDOSE HUELLA GENETICA MULTILOCUS DE DNA, O FINGERPRINT.

lOS MONOLOCUS SON USADOS SOLO EN HUMANOS, LOS MULTILOCUS EN ANIMALES, Y HUMANOS.

APLICACIONES: QUIMICA FORENSE, CRIMINOLOGIA, PRUEBAS DE PATERNIDAD, DIAGNOSTICO PREVENTIVO DE ENFERMEDADES HEREDITARIAS, COMO EL ALZHEIMER, DIABETES, ARTERIOSCLEROSIS ATROFICA MULTIPLE, PARKINSON.

1. Identificacion con un chip biologico, basado en tecnicas fotolitograficas.
2. deteccion de mutaciones y POLIMORFISMOS.
3. secuenciacion.
4. DIAGNOSTICO CLINICO Y DETECCION DE MICROORGANISMOS.
5. seguimiento de terapias en pacientes.
6. Uso muy grande en MEDICINA PREVENTIVA.