estoy estudiando auxiliar de veterinaria, y nose bien en que pruebas consiste el test, y que instrumental es el necesario y como debe de cuidarse ese material.
se que esta prueba se puede realizar para detectar el parvovirus.
muchas gracias a todos saludos
2007-03-24 05:51:15 · 6 respuestas · pregunta de Anonymous en Ciencias y matemáticas ➔ Medicina
Según se es la prueba de sangre para saber quien es portador del VIH (SIDA)
Lamento no tener más información
2007-03-24 05:56:35 · answer #1 · answered by flaquita 6 · 0⤊ 0⤋
Fases de un ensayo ELISA
Las 4 fases de un ensayo ELISA son las siguientes :
Conjugación del anticuerpo o del antígeno con un enzima (peroxidasa, fosfatasa alcalina,...). El anticuerpo conjugado al enzima se emplea en los ensayos directos e indirectos, sandwich, etc.. El antígeno marcado se emplea en ensayos de competición de antígeno.
Unión del antígeno (o del anticuerpo) a los pocillos. La unión de anticuerpos o antígenos se realiza con facilidad a la superficie de plásticos tratados que tienen gran afinidad por proteínas.
Formación de una o más capas de inmunocomplejos. En el caso del antígeno unido a la placa se puede detectar mediante un anticuerpo anti-antígeno marcado (ELISA directo) o empleando un anticuerpo primario anti-antígeno y un secundario anti primario marcado (ELISA indirecto). Este segundo método permite la amplificación de la señal al poderse unir uno o más anticuerpos secundarios a cada anticuerpo primario. En el caso del anticuerpo unido a la placa se incuba con una mezcla de antígeno y antígeno marcado. Se ensayan diferentes relaciones de antígeno frio frente a una cantidad fija de antígeno marcado. Es el ensayo de competición del antígeno.
Revelado de la reacción enzimática. Después de un lavado para eliminar todos las moléculas marcadas no fijadas en forma de inmunocomplejos se añade el sustrato enzimático en solución. Se deja reaccionar y se lee la densidad óptica (D.O.) mediante espectrofotometría. En el esquema se muestra la reacción asociada a un ELISA directo.
Tipos de ensayos ELISA
Se han desarrollado múltiples variantes de ensayos ELISA que permiten desde la cuantificación de un antígeno en solución, la detección de un anticuerpo en una solución (por ej. en el clonaje de anticuerpos monoclonales), o la determinación de la subclase (idiotipo) de un anticuerpo. A continuación se describen los más comunes.
ELISA directo (ensayo ELISA simple de dos capas). Las placas ELISA se preparan recubriendo los pocillos con las soluciones en las que se sospecha se encuentra el antígeno. Se incuban con anticuerpos marcados. Indican la presencia de antígeno en la solución analizada. Es necesario incluir controles negativos que serán muestras del mismo tipo de las analizadas (sangre, orina, ...) pero en las que se tenga la certeza de la ausencia del antígeno buscado. Asimismo se incluyen controles positivos (soluciones donde se encuentra el antígeno buscado, o bien se le ha añadido).
ELISA indirecto. Las placas ELISA se preparan de una forma idéntica a la anterior. Los controles positivos y negativos son los mismos. El sistema de detección emplea dos anticuerpos : uno primario contra el antígeno, y uno secundario marcado contra el primario. La detección tiene mayor sensibilidad por presentar una amplificación de señál debida a la unión de dos o más anticuerpo secundarios por cada primario. Es el ensayo más popular, como lo es la inmunofluorescencia indirecta, pues un mismo secundario marcado y un mismo sistema enzimático permite cuantificar una gran cantidad de antígenos.
ELISA sandwich. (ensayo de captura de antígeno y detección mediante inmunocomplejos). Se trata de un ensayo muy empleado en el que se recubre el pocillo con un primer anticuerpo anti-antígeno. Después de lavar el exceso de anticuerpo se aplica la muestra problema en la que se encuentra el antígeno, que será retenido en el pocillo al ser reconocido por el primer anticuerpo. Después de un segundo lavado que elimina el material no retenido se aplica una solución con un segundo anticuerpo anti-antígeno marcado. Así pues cada molécula de antígeno estará unida a un anticuerpo en la base que lo retiene y un segundo anticuerpo, al menos, que lo marca. Este ensayo tiene una gran especificidad y sensibilidad debido a la amplificación de señal que permite el segundo anticuerpo
2007-03-24 05:57:57 · answer #2 · answered by Susi 2 · 1⤊ 0⤋
Ganar dinero con el trading no es fácil y hay que seguir un método preciso.
Tomé un curso que me ha ayudado a hacer un montón de dinero fuera de la negociación. http://trading-on.info
Buena suerte!
2014-11-23 10:05:40 · answer #3 · answered by Jogendra 2 · 0⤊ 0⤋
ELISA se le conoce mundialmente al ENSAYO INMUNOENZIMATICO o EIA. Debido a que es versátil, sensible y fácil de manejar, este método se adapta para la identificación de un numero cada vez mayor de moléculas de interés biológico, sobre todo para el diagnostico clínico.En lo fundamental, consiste en pegar el Ag o Ac, según sea el objeto de la búsqueda, a una fase sólida como perlas, discos, tubos, microplacas de polivinil o poliestireno.La reacción continua su desarrollo al agregar los reactantes, que se adhieren a la fase sólida y el material sobrante se elimina por simples lavados entre cada paso. Para revelar la reacción se emplean conjugados de Ac marcados con en substrato adecuado, dan una reacción coloreada fácil de medir mediante espectrofotómetro o a simple vista.La cantidad de color presente en un determinado tiempo es directamente proporcional a la concentración del Ag o Ac presente en la muestra.
Hay variantes del método de ELISA para subsanar las dificultades o características del material a determinar.El método indirecto es el de mayor difusión y diagnostico clínico.Consiste en pegar el Ag a la fase sólida, lavar para eliminación el excedente, agregar de inmediato el suero problema e incubar el tiempo necesario para que se efectué la reacción. De nuevo se lava para eliminar el material que no reacciono, se agrega anti-gamma marcada con la enzima ( este Ac. Debe ser de la misma especie animal del Ac. a determinar ), se vuelve a incubar y al final se agrega el substrato correspondiente para que desarrolle el color, en el caso de una prueba positiva.
Cuando lo que se desea investigar es un antigeno, la técnica que se aplica es la de doble anticuerpo o emparedado (sándwich).Aquí el Ac se pega a la fase sólida y se aplica la solución que contiene el Ag a determinar, el paso siguiente es adicionar de nuevo el anticuerpo que sirvió de anclaje a un segundo anticuerpo, marcado en una enzima, y por ultimo el substrato.
Se ha desarrollado ELISA para proceder a la determinación de Antigenos bacterianos, virales, hongos.Cabe mencionar que la sensibilidad del ELISA hace que sea necesario emplear reactivo altamente específicos para reducir la reactividad cruzada indeseable, actualmente muchos de estos reactivos se encuentran disponibles comercialmente.
En ELISA, puede haber falsos positivos, y para evitar esto, se debe tener el reactivo en buenas condiciones ( de temperatura ). No obstante la sensibilidad del ELISA puede aumentar utilizando substratos que generan fluorescencia o productos reactivos por
interacción enzimático, como consecuencia a esto tenemos cantidades menores de errores ycantidades mínimas requeridas para substratos coloreados, ayudando todo esto a la sensibilidad del ELISA.
Actualmente, es uno de los métodos mas empleados para la detección de varios tipos de virus, entre ellos el Virus de Inmunodeficiencia Humana , Hepatitis B y C, los cuales se tomaran como ejemplo para la practica de ELISA.
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS ANTI VIH
Uno de los pasos mas importantes en el esfuerzo de poner un limite a la diseminación del Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA) fue el descubrimiento de una prueba para detectar anticuerpo contra el virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH) en la sangre.El uso de ELISA o EIA y el de la especifica Western Blot se remonta desde 1985, y ha sido uno de los mayores factores para lograr hacer las transfusiones de sangre dasi 100% seguras.De cualquier manera, la presencia de estos anticuerpos en la sangrede una persona es señal de la presencia o del desarrollo futuro de SIDA o de otra enfermedad relacionada con el VIH y de la transmisión del virus, la prueba de anticuerpos ant-VIH ha llegado a ser materia de controversia.
Es de especial interés hacer notar que en la patogénesis de la enfermedad, la respuesta inmune a las proteínas de la envoltura del virus ocurre mas temprano en el curso de la infección que la producción de anticuerpos para las proteínas del núcleo.Ambos anticuerpos, antinucleares y antienvoltura, pueden ser detectados por pruebas estándar para indicar infección con VIH, aunque algunas pruebas son preferibles que otras para detectar anticuerpos particulares.
Aunque se forman anticuerpos en respuesta a la infección con VIH y aunque aparecen para eliminar al antigeno VIH detectado en sangre, son incapaces de neutralizar o destruir el virus completamente y de este modo eliminar la infección.En general los títulos de anticuerpos en pacientes en periodos tardíos de infección con VIH son mas bajos que los de una persona recién diagnosticada.Aunque hay que tener en cuenta que en la etapa inicial de la infección, existe un periodo en el cual estando la persona infectada, no presenta anticuerpos que se detecten en ELISA, esto ocurre porque todavía no existe una adecuada respuesta inmunológica contra el VIH y por lo tanto existen concentraciones muy bajas de anticuerpos, a este periodo se le llama PERIODO DE VENTANA INMUNOLÓGICA , pues las pruebas de anticuerpos resultan negativas, este periodo puede durar de 3 a 6 meses o hasta un año, dependiendo de la individualidad especifica de cada persona.
No es sorprendente como la patogénesis de la infección envuelve la supresión del sistema inmune, especialmente la reducción de linfocitos T4, células que normalmente facilitan la producción de anticuerpos por los linfocitos B.Esta supresión de la respuesta inmune permite la reaparición del virus en la sangre y el incremento de la infectividad en periodos tardíos de la infección.
Algunas de las ventajas de ELISA son : que es relativamente barata, es fácil de realizar y es sensitiva.Una segunda generación de ELISA ha sido desarrollada.En estas pruebas antigeno puro de núcleo o de envoltura es sustituido por partículas de VIH rotas.
Algunos laboratorios están utilizando técnicas de ingeniería genética para permitir a la bacteria que produzca antigenos específicos VIH o combinaciones de antigenos.Las ventajas de usar estos antigenos fabricados o proteínas virales recombinantes son el dejar de trabajar con VIH vivos y el peligro de infección que disminuye de esta manera, y la eliminación de la contaminación de la preparación de antigeno por restos celulares que pueden causar reacciones falsas positivas y por ultimo el incremento de la sensibilidad y especificidad de la prueba.
Ojala te sirva! Saludos...
2007-03-24 11:59:31 · answer #4 · answered by Stephanie 3 · 0⤊ 0⤋
Hola te paso una pagina, espero poder ayudarte, http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003332.htm
saludos
2007-03-24 07:58:14 · answer #5 · answered by Juan Manuel 3 · 0⤊ 0⤋
Test del VIH, también llamado "prueba del sida"
El primer test utilizado se trata de un ensayo inmunoabsorvente unido a enzimas (ELISA). Este es un examen para verificar si la sangre de una persona contiene anticuerpos contra el virus VIH. Este examen no puede detectar el virus en sí mismo o los virus del ácido nucleico pero sí los anticuerpos, especialmente las proteínas, que el sistema inmunológico de la persona infectada desarrolla para luchar contra el virus. Si estos anticuerpos son encontrados, el análisis da "positivo". En este caso, el ELISA se repite para estar seguros de los resultados.
Si este segundo ELISA da de nuevo resultados positivos, se realiza otro análisis más sensible, llamado tranferencia Western. Si la transferencia Western da positiva, se analiza una segunda muestra de sangre con esta misma prueba. Sólo si todos estos análisis dan positivos, la persona es considerada VIH positiva. Los resultados positivos falsos son extremadamente extraños (1 de cada 20.000 tests).
Como el sistema inmunológico necesita algún tiempo para desarrollar anticuerpos en cantidades tales para ser detectadas, este examen no puede funcionar justo después de que la persona haya sido infectada. Son necesarias de 6 a 12 semanas después de la exposición al virus para que sean desarrollados suficientes anticuerpos para ser medidos. Una persona que se realizara la prueba del VIH durante este periodo podría dar resultados negativos incluso estando infectada. Esto es lo que se denomina resultado negativo falso.
Una detección temprana del VIH sólo es posible a través de la medición de los virus del ácido nucleico en la sangre del paciente (ver "carga vírica"). Pero estos análisis son mucho más caros y no se utilizan en exámenes de rutina.
¿Cómo se desarrollaron los modernos fármacos antivirales?
En la búsqueda de fármacos modernos, en vez de trabajar e investigar con los medicamentos que serían más efectivos, los científicos investigaron primero los mecanismos moleculares de la enfermedad e intentaron encontrar las características más favorables de los fármacos para ésta. En este sentido, la investigación básica puede ser muy importante: por ejemplo, cuando los científicos buscaban la causa del sida, la cual más tarde aparecía en forma de retrovirus llamado VIH, fue de mucha ayuda el amplio conocimiento sobre retrovirus que tenian, así como de sus características generales.
Tras la identificación del virus VIH, los científicos aprendieron cómo era su apariencia física en detalle, qué componentes tenía y el papel específico que estos componentes tenían durante el ciclo de vida del virus en una célula humana. Tanto para la identificación del virus como para la investigación de su estructura molecular y sus funciones, se usaron muchos procedimientos estándar de la biotecnología moderna y de la tecnología genética. El virus fue estudiado directamente utilizando la microscopia electrònica, su genoma se presentaba secuenciado, y todas sus proteínas fueron caracterizadas e identificadas sus funciones. Finalmente, todos estos datos reunidos por los científicos de todo el mundo nos permiten entender el VIH y el mecanismo de su ciclo de vida en una célula humana.
Teóricamente, hay muchos pasos en el ciclo de vida de los virus, los cuales forman parte de los objetivos de los fármacos antivirales.
Hasta ahora los mejores resultados obtenidos son los derivados de dos enzimas virales, la "transcriptasa inversa" (RT) y la "proteasa". El primer fármaco, descubierto en 1986, fue el AZT, también llamado inhibidor de la transcriptasa inversa (RT). El primer inhibidor de proteasa (IP) llegó al mercado en 1996. Los IPs son fármacos muy efectivos pero pueden acarrear serios problemas secundarios. Actualmente, todos los fármacos anti VIH en uso inhiben estas dos enzimas víricas. El intento de bloquear otras enzimas víricas o importantes estructuras, por ejemplo, el receptor de moléculas que el virus necesita para identificar sus células objetivo, son sujeto de constante e intensa investigación.
Medición de la carga viral
La medida de la carga viral significa la determinación directa de la cantidad del virus VIH en la sangre del paciente. Para ser exactos, lo que es medido es la cantidad de copias de VIH-ARN por ml de plasma sanguíneo. Los métodos usados están basados en la amplificación directa del ácido nucleico (es decir, multiplicación fuerte y definida con exactitud de las copias de ARN en la muestra), principalmente mediante la PCR, o bien, en la elevada amplificación de la señal medida (valoración del ADN ramificado, bDNA). Normalmente, los límites de detección más bajos son de 5 a 20 copias víricas por ml de plasma, dependiendo del método que sea usado. Éstos son números muy bajos; si comparamos, más de 30.000 copias víricas por ml de plasma es la cantidad que puede observarse en una carga vírica alta. La detección hasta ahora más elevada de virus en sangre es de 10 millones de copias por ml de sangre.
La carga viral como avance para el progreso de la infección es muy significativa y hoy es el indicador más importante para comprobar la efectividad de la terapia antiretroviral o para determinar una nueva forma de actuación si existe la necesidad de cambiar de tratamiento. El objetivo de la terapia es conseguir la cantidad mínima de carga vírica posible, y lo ideal, un nivel "indetectable" de copias de virus en la sangre del paciente.
Recuento de linfocitos t o recuento de los linfocitos CD4
Los linfocitos t o linfocitos CD4 son un tipo especial de glóbulos blancos, que juegan un papel central e importante en el sistema inmunológico de un ser humano. Desafortunadamente, son los huéspedes favoritos para el VIH, que los ataca y destruye. Una persona sana tiene entre 800 y 1.500 linfocitos CD4 por microlitro de sangre. Si hay menos de 200 linfocitos CD4 por microlitro de sangre, el sistema inmunológico se presenta incompleto.
En combinación con la carga vírica, el recuento de los linfocitos CD4 es un fiel indicador del estado del paciente. El recuento de los linfocitos CD4 se hace directamente de una muestra de sangre usando el método denominado "citometría de flujo (láser)". A través de la fijación de anticuerpos monoclonales, los cuales reconocen estructuras específicas de estas células, los linfocitos CD4 son identificados con marcadores fluorescentes especiales. Esto permite distinguir estas células de las demás en la muestra y contarlas mientras pasan por el detector.
El "lavado" de los espermatozoos
El semen de un hombre VIH positivo puede contener una gran cantidad de virus, incluso estando bajo terapia antiretroviral. Por suerte los virus se adhieren a los espermatozoos vivos (que son necesarios para la fecundación), pero residen en el semen conectados con espermatozoos muertos y con algunas otras células. Por eso, es posible separar los espermatozoos vivos que se deseen de los virus y de las células infectadas a través de una especie de "lavado" que incluye tres pasos de un cuidadoso centrifugado gradual.
Después, se examina cuidadosamente una muestra del esperma lavado para ver si existe ácido nucleico vírico, usando un método de detección altamente sensible llamado PCR. Durante este proceso los espermatozoos sobrantes son almacenados por crioconservación para mantenerlos vivos, y después de comprobar que están libres de virus (es decir, no debe haber ni el menor rastro de virus ADN o ARN). Este esperma se usa para realizar una inseminación artificial o, si fuera necesario, una FIV.
El diagnóstico de las entidades virales es uno de los mayores retos a los que se enfrenta la medicina actual, particularmente en países semejantes a Colombia donde el diagnóstico viral se hace de manera empírica. Durante las últimas décadas, el desarrollo progresivo de nuevas y mejores herramientas para evidenciar las causas de tipo viral, hace posible que estas entidades se puedan descubrir y estudiar no sólo a nivel de laboratorios especializados, sino también en los comunes. Las pruebas diagnósticas simples, rápidas y poco costosas para la demostración de antígenos han reemplazado las técnicas tradicionales, largas y dispendiosas y esto ha producido una mayor agilidad en la definición del diagnóstico. Por otro parte, descubrir anticuerpos es importante para documentar la prevalencia de una infección en individuos y poblaciones. Además, las pruebas de demostración molecular han mejorado la probabilidad de evidenciar los agentes virales pues se documenta la infección de modo categórico, y se estudian su progresión y seguimiento terapéutico. En Colombia es importante promover el manejo y ejecución adecuados y racionales de las técnicas disponibles, ya sean las tradicionales o las nuevas que mejoren los diagnósticos virales y diferenciales. Este artículo brinda un compendio sobre el tema, revisa las pruebas diagnósticas de mayor aplicabilidad en virología, lo que tiene utilidad como guía rápida, y además ofrece material de consulta tanto para profesionales como para estudiantes del área de la salud.
Palabras claves: Virus. Diagnóstico. Infección viral.
Colombia Médica 2000; 31: 135-150
Conocer cuando una infección es de etiología viral es muy importante porque determina un cambio en la conducta clínica y en el manejo terapéutico del paciente. El diagnóstico viral por el laboratorio es de gran ayuda para confirmar la etiología, así como para el seguimiento clínico de la entidad. Adicionalmente, realizar un diagnóstico adecuado permite conocer la epidemiología de la infección viral y determinar las connotaciones que implica a nivel de salud pública; tal es el caso de infecciones como el dengue y la fiebre amarilla. Por las características estructurales, ecológicas y biológicas de los virus, su demostración in vitro es y será uno de los mayores retos a los que se enfrentan los científicos. Al igual que la mayoría de los microorganismos, los virus se pueden descubrir ya sea de una forma directa o indirecta. Las pruebas directas son las que evidencian al virus o algunos de los antígenos virales que se pueden encontrar presentes en los tejidos o fluidos humanos. Las pruebas indirectas son las que se utilizan con más frecuencia y básicamente demuestran un contacto del huésped con el agente viral mediante la determinación de anticuerpos específicos contra el virus. En muchos casos el diagnóstico de infección viral se hace por el cuadro clínico del paciente y la presencia de anticuerpos contra el agente viral sospechoso; sin embargo, hay algunas técnicas rápidas para demostrar los antígenos virales y también se sabe de técnicas para amplificar su material genético.
No obstante la variedad de pruebas diagnósticas que se han desarrollado, es necesario tener en cuenta que para un óptimo diagnóstico de las entidades virales, debe haber una adecuada indicación, recolección y transporte de las muestras que se han de analizar para este propósito.
LA TOMA DE LAS MUESTRAS
Un factor determinante y definitivo para el aislamiento viral es la obtención temprana de una muestra adecuada, esto debido a que la excreción del virus tiende a ser por pocos días y la concentración de partículas virales disminuye progresivamente con el tiempo. Además, la aparición de anticuerpos en la fase aguda neutraliza el virus y ayuda a formar complejos inmunes. Tener en cuenta lo anterior es importante, pues si la concentración de virus en la muestra clínica es muy baja, se pierde fácilmente la posibilidad de infectar células vivas y por tanto demostrarlo en los cultivos celulares. Las muestras se deben tomar en las condiciones de mayor esterilidad posibles, identificadas con el nombre del paciente, lugar de procedencia, el tipo de muestra, la fecha y hora de la toma y un resumen corto de la historia clínica con la solicitud de examen que se desea realizar. Para una muestra clínica adecuada es necesario tener en cuenta factores adicionales que garanticen la conservación de las partículas virales activas, como: el tiempo de transporte de la muestra, la temperatura y el medio de preservación que se utilice para éste (es decir medios de transporte que mantengan la viabilidad viral)1-4. Las muestras no se deben dejar a temperatura ambiente o en incubadora, tampoco es recomendable congelar y descongelar las muestras, pues así se podría alterar la estructura del agente viral (Cuadro 1).
Para el aislamiento viral, las muestras clínicas se deben tomar en el momento indicado y rápidamente inocularlas en células vivas (Cuadro 2). En su defecto se guardan en nevera entre 4º C-8º C o en hielo de agua hasta que sea posible su inoculación. Si el tiempo de inoculación se prolonga más de 4 días, se congelan a -70° C y se utiliza un medio de transporte según sea el tipo de muestra. Se pueden utilizar algunos criopreservantes para mejorar la recuperación de los agentes virales, entre ellos dimetil sulfóxido (DMSO), suero, leche descremada, proteínas, sacarosa, glicerol y sorbitol5. Muy pocos agentes virales se pueden mantener por un período relativamente largo o de aun días, cuando se transportan en un medio adecuado y en hielo a 4º C4.
A continuación se describen las principales técnicas para diagnóstico viral.
TECNICAS DIRECTAS PARA LA DEMOSTRACION VIRAL
Dentro de las técnicas directas es posible incluir:
¥ Las que visualizan la partícula viral o su efecto celular específico como las tinciones para microscopía de luz, la microscopía electrónica y el cultivo o aislamiento viral.
¥ Las pruebas para demostración de antígenos virales: los inmunoensayos (ELISA, IFA, RIA) y las pruebas de látex.
¥ Las que evidencian la presencia de material genético viral como: ensayos de amplificación genética (reacción en cadena de la polimerasa, PCR, por sus siglas en inglés, LCR, etc.) e hibridización (sondas, ADN ramificado, etc.)
¥ Visualización de la partícula viral
Microscopía de luz. Se efectúa mediante tinciones especiales, generalmente son coloraciones con Wright o Giemsa en extendidos provenientes de lesiones vesiculares donde se visualizan las inclusiones o los cambios celulares ocasionados por la invasión viral. Un ejemplo de esto lo constituye el estudio de inclusiones producidas por el citomegalovirus (CMV) en sedimento urinario y la prueba de Tzank para observar las células infectadas por herpes (o varicela zóster), para ésta se hace un raspado de la base de las vesículas y después de fijarla con metanol, se hace la tinción y se observan las células, que se tornan agrandadas, con múltiples núcleos y un citoplasma que se tiñe de oscuro además de inclusiones intranucleares eosinofílicas. La sensibilidad de esta técnica depende de su preparación, tinción y la experiencia del observador, generalmente es menor que la de la inmunofluorescencia y el cultivo viral1,6,7.
La microscopía electrónica. Permite visualizar la partícula viral debido a la gran resolución del microscopio electrónico. Para este fin se utilizan dos tinciones especiales con sales de metales pesados como el uranio o el tungsteno. La primera es la tinción negativa donde el acetato de uranilo forma una especie de molde viral que permite detallar la estructura del virus. La segunda tinción es la del sombreado, donde las partículas virales se ponen en un ángulo donde el metal que se utiliza en ella se deposita sobre el virus pero no sobre su sombra y sólo se visualiza lo que no se ha cubierto con el metal. Esta técnica no revela las estructuras internas del virus sino su forma y dimensiones. El uso de equipo especializado y costoso, el elevado nivel técnico que requiere, la baja sensibilidad cuando hay un bajo número de partículas virales y el hecho de que en algunos casos la morfología per se no es suficiente para un diagnóstico viral definitivo, hacen que este sistema sea poco usado y sólo se emplee a nivel investigativo o académico. La microscopía electrónica se ha utilizado para el diagnóstico del agente Norwalk, adenovirus entéricos, calicivirus, astrovirus y coronavirus en materia fecal así como de otros virus para los cuales no se tiene disponibilidad de otras pruebas diagnósticas comerciales o aquellos que no son cultivables5,7.
Aislamiento viral en cultivo. Los virus son microorganismos intracelulares y para evidenciarlos, se deben utilizar sistemas basados en líneas celulares que permitan su desarrollo. La invasión viral se evidencia a través de un cambio celular o efecto citopático (EC) y mediante pruebas complementarias. Los sistemas de cultivo más utilizados son:
a) Cultivos primarios. Se caracterizan por tener varios tipos de células. La mayoría son de crecimiento limitado in vitro, generalmente resisten 5 a 10 subcultivos y son permisivas a un amplio rango de virus; p. e., células de riñón embrionario humano (REH).
b) Cepas de células diploides. Derivadas de tejidos normales, se utilizan en la producción de vacunas, aislamiento viral y como sustratos para probar materiales tóxicos. Están constituidas por un tipo de células que retienen su número cromosómico diploide original; p.e., los fibroblastos de pulmón.
c) Líneas celulares. Son células inmortalizadas en el laboratorio, resisten (n) número de pases y se caracterizan por derivarse de tejidos normales o de tumores malignos y se han pasado por los menos 70 veces in vitro; p.e., células Vero (riñón de mono verde africano), LLC-MK2 (riñón mono rhesus) y BSC-1 (también de tejido normal de riñón de mono) y HeLa y HEp-2 derivadas de células humanas malignas. Éstas generalmente tienen un número variable de cromosomas y a veces también son denominadas líneas celulares heteroploides. Otras líneas celulares existentes son A9 (fibroblastos subcutáneos de ratón), BHK21 (fibroblastos de hámster), BRL3A (epitelio de hígado de rata), GHI, GH3 (epitelio de rata), L929, LS, S180 (fibroblastos de ratón), L1210, L5178Y, P388D1 (linfocitos de ratón), MCF7 (epitelio humano), 3T3-L1 (fibroblastos de ratón suizo), 3T3-A31 (fibroblastos de ratón BALB/c) y NRK49F (fibroblastos de riñón de rata).
2007-03-24 07:49:43 · answer #6 · answered by mariale 5 · 0⤊ 0⤋