est-il possible de traiter des cellules vivantes à la proteinase K afin d'éliminer les protéines de surface tout en préservant l'intégrité de la membrane?
si cela est possible de faire une telle digestion ménagée, merci de me donner les conditions de temps, concentration et température d'un tel traitement.
PS: j'ai vraiment besoin d'une réponse... merci d'éviter les "j'en sais rien"....
2007-03-08 21:00:00 · 3 réponses · demandé par kuy2gnu 4 dans Sciences et mathématiques ➔ Biologie
quand je parle d'intégrité de la membrane, c'est pour signifier que je ne veux pas que mes cellules explosent...
en fait je voudrais pouvoir "raser" mes cellules... ^_^
2007-03-08 21:19:26 · update #1
http://www.protocol-online.org/
Si ce n'est pas encore fait, va demander ca dans des forums de pros!
Comment veux-tu eliminer les proteines de la membrane plasmique sans toucher a l'integrite de cette membrane? C'est injouable a priori, non?
Sinon, un traitement glycine pour enlever tout ce qui interagit sur la surface, ca ne t'irait pas?
ok. Je ne suis pas biochimiste, et ca ne court pas les rues ici. Tu devrais vraiment chercher sur les forums genre protocol online, je trouve plein de trucs techniques la-bas...
Le strip glycine, j'utilise ca pour detacher mes anticorps sur des membranes, et c'est aussi utilisable sur cellule quand tu veux detacher des proteines. Mais je n'en sais pas plus.
bon courage.
je viens de bouffer avec des biochimistes, j'ai donc pose la question: leur reponse a justement ete la proteinase K, mais ils ne savaient pas si ca marchait avec les cellules vivantes et quel etait le protocole. Va chercher sur le net, et si tu ne trouves pas, essaie! Ca devrait etre cool!
2007-03-08 21:14:01 · answer #1 · answered by Jojo 6 · 0⤊ 0⤋
Je pense que tu peux y parvenir en agissant sur 3 paramètres:
-la concentration en protéinase K (très faible)
-la durée de contact
-la température
je pense qu'aucun d'entre nous n'est capable de te donner les paramètres des conditions opératoires.
c'est à toi de faire la mise au point, par contre tu peux déjà essayer avec des globules rouges qui semblent être un bon modèle en effet tu pourras trouver les bonnes conditions en mesurant le % de lyse après tes essais : une lyse trop importante révélera une digestion trop forte!
2007-03-12 01:44:47 · answer #2 · answered by mibone21 3 · 0⤊ 0⤋
retourne a la fac au lieu de glander chez toi!
2007-03-08 22:30:12 · answer #3 · answered by bijou 6 · 0⤊ 2⤋