l'ADN complémentaire?

Question

Bonjour, je fais une étude sur les différent transcrits d'un gène, et je me pose plein de questions, la première un gène qui possede plusieurs transcrits possede-il différents promoteurs pour ces différents transcrits? pourqui on fait une RT PCR pour detecter ces transcrits,ET NE PAS AMPLIFIER L'ARN MESSAGER?merci à tous

Answer 1

pour la premiere question les 2 cas existe

certain gene on plusieur promoteurs et/ ou plusieur depart de transcription ce qui donne de fait des ARNm different
en fait d ' apres les derniere chose que j 'ai lu il y a presque toujours plusieur depart de transcription mais dans une partie des cas l'un d eux est ultra majoritaire alors que dans les autre plusieur semble fonctionné a egalité



d autre part il existe l'epissage alternatif ( variation dans l' epissage des intron ) qui peut expliquer qu un meme gene avec un meme promoteur donne des transcrits mature(ARNm) differents
les different cas sont la retention d intron , le saut d'exon ,lespied 5' et 3' des intron alternatif (change la taille et la position de l'intron) ..

c est diferent transcrit peuvent coexister ou etre specifique de certain tissu ou condition



Pour ce qui est de la PCR en fait l ARN peu effectivement servir de matrice pour faire de l'ADN (cf retrotranscription )
mais le probleme est que pour faire une PCR il faut une matrice DOUBLE BRIN ADN de facon a ce que le mecanisme meme de la pcr avec les amorce qui se font face et qui produise des adn sur lesquel elle peuvent se reassocier puisse fonctioner

essaye de dessiner une PCR avec une matricd simple brin en fesant bien attention a l' orientation des amorce ... tu vera c est impossible !

C est pourquoi pour amplifier les ARN on synthetise tout d' abord un brin d' ADN complementaire de la matrice ARN
ensuite on detruit l ARN a l aide de la RNAse H et on reforme un brin ADN complementaire du premier et de sequence identique a la sequence de l ARN initial

cela permet d' avoir la sequence de l'ARNm mais sous forme d'ADN . l'avantage est que l on peut faire plein de chose sur l ADN double brin qu on ne peut pas faire sur ARN , sequencage et clonage notament

Answer 2

La diversite des trancrits d'un meme gene peut venir de l'epissage alternatif (http://fr.wikipedia.org/wiki/%C3%89pissage#.C3.89pissage_alternatif).
Grace a ca, avec le meme gene, tu peux te retrouver avec differentes proteins dans differents tissus.

Je ne comprends pas bien ta deuxieme question: pour la RT PCR, on part de l'ARN messager pour faire la PCR, c'est plutot simple, pas cher et ca marche bien, tu peux ensuite sequencer, cloner, tout ce que tu peux faire avec du cDNA. Comment voudrais-tu amplifier l'ARN messager?

Answer 3

je suis d'acord avec la première réponse, mais pour la deuxième, c'est qu'en fait, ou du moins d'après ce que j'ai compris,lors de la transcription inverse, on obtient pas que le brin d'ADN complémentaire mais un brin d'ADN et un brin d'ARN messager,alors lors de la PCR et dans ce cas on amplifie pas que l'ADN, mais le double brin, ADNc- ARN m ,et donc , donc l'ARN peut s'amplifier, et c'est là ma confusion, quelqu'un a une explication?

Answer 4

à ta première question un gène posséde différents promoteurs pour différents transcrits.
à la seconde question : il est impossible d'amplifier de l'ARN. on ne peut amplifier par PCR que de l'ADN. C'est pour cette raison que l'on fait une RT PCR c'est à dire que l'on utilise une reverse transcriptase qui va "transformer" l'ARN en ADN qui lui pourra être amplifié.